Методы исследования. Метод определения активности карбоксипептидазы N

Активность КПN определяли в сыворотке крови нингидриновым методом [61].

Опытные пробы содержали 20 мкл 3,5 мМ раствора CoSO4, приготовленного на 100 мМ Трис-HCl буфере, pH 7,6 и 40 мкл препарата фермента. Контрольные пробы содержали 20 мкл 100 мМ Трис-HCl, pH 7,6 и 40 мкл препарата фермента. Пробы преинкубировали 8 мин при 37oC, реакцию начинали прибавлением в опытные пробы 10 мкл гиппурил-арг, приготовленного на 100 мМ Трис-HCl буфере, pH 7,6 (конечная концентрация в пробе 5 мкМ). Реакцию проводили 120 мин при 37oC и останавливали прибавлением 30 мкл 10 % трихлоруксусной кислоты.

Пробы центрифугировали 20 мин при 4000 об/мин, отбирали 50 мкл надосадочной жидкости, приливали 1 мл нингидринового реактива. Далее пробы встряхивали, выдерживали 12 мин на кипящей водяной бане и измеряли оптическую плотность на КФК-2 при 595 нм против H2O.

Активность КПN определяли как разность оптической плотности опытных и контрольных проб и выражали в нмоль аргинина, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка.

Концентрацию белка в пробах определяли биуретовым методом.


Также смотрите:

Особенности поведения
Ондатра перемещается по водоёму по своему участку в связи с поиском пищи, а так как кормовая база достаточно обильна на этой речке, то длина этих перемещений колеблется в пределах 150 метров. Весна- пора активного расселения ондатр. В это время их можно увидеть путеш ...

Выводы
Сейчас уже точно выяснено, что никакого вреда выдра рыбным запасам не причиняет, а наоборот, очищает от больной и сорной рыбы, пожирающих икру рыб ценных пород! Тот, кто видел нерестилища кеты и горбуши, конечно помнит жадные стайки рыб, снующих между лососями и пожир ...

Антивитамины В1.
В 1944 г. в СССР было синтезировано соединение окситиамин, близкое по структуре к витамину В1,но отличающееся от него тем, что вместо аминогруппы в нём имеется оксигруппа. Второе вещество, обладающее антивитаминным действием было названо пиритиамином, так как в его ...