Определение физико-химических свойств ферментовСтраница 1
Определение рН- и температурных оптимумов ДАБ-ацетилтрансферазы.
При определении рН-оптимумов применяли буферные системы рН 6.0-9.0. Использовали следующие буферные растворы: 100 мМ натрий-фосфатный буфер, рН 6.0-8.0; 100 мМ Трис-HCl буфер, рН 7.0 -9.0. Температурные оптимумы определяли в интервале температур от 5 до 35 ºС с использованием термоконтроллера “Shimadzu UV-160” (Япония).
Таблица 3. Буферы и растворы, использованные в работе.
|
Буферы/растворы |
Применение |
Состав | |
|
Компоненты |
Концентрация | ||
|
TBE, 5× |
Электрофорез ДНК в агарозном геле |
Трис-HCl Борная кислота ЭДТА, рН 8.0 |
0.445 М 0.445 M 0.01 М |
|
ТЕ-буфер |
ЭДТА Трис-HCl, рН 8.0 |
1 мМ 10 мМ | |
|
10×ПЦР буфер |
ПЦР |
Трис-НСl, рН 8.9 (NH4)SO4 MgCl2 Tween 20 |
670 мМ 170 мМ 1.5 мM 0.1% |
|
10×лигазный буфер |
Лигирование фрагментов ДНК |
Трис-HCl, рН 7.8 MgCl2 DTT АТФ БСА |
500 мМ 100 мМ 100 мМ 10 мМ 250мкг/мл |
|
Раствор I |
Выделение плазмидной ДНК |
Глюкоза ЭДТА Трис-HCl, рН 8.0 |
50 мМ 10 мМ 25 мМ |
|
Раствор II |
Выделение плазмидной ДНК |
NaOH SDS |
0.2 N 0.1% |
Таблица 4. Плазмиды, использованные в работе.
|
Плазмиды |
Описание |
Ссылка |
|
pCM160 |
OriT, OriV, Plac, PmxaF, LacZ’, KmR |
Marx and Lidstrom, 2001 |
|
pET/ectA |
Ген ectA из M. marina встроен в pET28b+ |
Данная работа |
|
pZero-2 |
OriP, OriF1, Plac, KmR |
“Invitrogen” |
|
pZero/ectA |
Ген ectA из M. marina встроен в pZero |
Данная работа |
|
pBSL-180 |
Мини-Tn10 транспозон: ori R6K, mob, nptII R, ampR, lacI, tnp |
M. F. Alexeyev, 1994 |
|
pBSL-180/pmax/ectABC |
Гены pmax/ectABC встроены в pBSL180 |
Данная работа |
Таблица 5. Праймеры, использованные в работе.
|
Праймер |
Ген - мишень |
Последовательность (5’-3’) | |||
|
EctHal EctA(halN) EctA(halC) ectArev ectF HalR HalF Tra3 Hal-REV2 CR Rtn Askn Askg AskF Hal-AskF(ad) Hal-REV2 Ect-operN(hal) Ect-operC(hal) Ect-operC2(hal) RevHal HalEctR-C C 20 PmaxF PmaxR TF TR vect57 vect53 |
ectA ectA ectA ectA ectA ectB ectB ectB ectB ectC ask ask ask ask ask ask ectABC ectABC ectABC ectR ectR адаптор pmax pmax pZero pZero
|
TTYGT(I)TGGCARGTNGC TTCCATGGCCAAAGACGTGAACGAGAT TTAAGCTTGGCTGCGGCCGAAGTC GCAGCAGCTCAATTAAC GATGGTGGTATTGAGGAGCTGC ACCATRTCYTCRAA CGGCTTTCGTATCGGTGTGC ACCGG(T/C)ACITT(C/T)TT(C/T)AGITT(C/T)GA GCATAAGAAGTCCTTTCGCACC GGIGG(A/G)TT(A/G)AANAC(A/G)CA ACCATRTCYTGYTCRAA TGTCGCCGATCAGECTTCCAAC CCTTGTGGATGATCGCCTCGA TGCTGCTGGAACACAAGAAATC CGAGGCGATCATCCAGGAGTTC GCATAAGAAGTCCTTTCGCACC TTGAATTCATTAGTTAGTAGGACAAGCAA TTTGGGCCCACGCGCGACATCGAAGTGC TTAAGCTTACGAGCGACATCGAAGTGC TTCCGACAAGGCGCATTACAAGC TTTAAGCTTCAGGCGGTCATCC CTCTCCCTTCTCGAATCGTAA TTGGTACCGCTTGTCGGGCCGCTTGC TTGAGCTCATCCGCGGTATCTCTCAGACGTT CCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCC GGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTT GAGAGGGAAGAGAGCAGGCAAGGAATGGAG AGGGAAGAGAGCAGGCAAGGAATGCTAG CTCTCCCTTCTCGAATCGTAACCGTTCGTAC GAGAATCGCTGTCCTCTCCTTC |
Также смотрите:
Особенности строения нервной системы
Нервная система регулирует деятельность всех органов и систем, обусловливая их функциональное единство, и обеспечивает связь организма как целого с внешней средой.
Структурной единицей нервной системы является нервная клетка с отростками – нейрон. Вся нервная система ...
Особенности строения и значение нуклеиновых кислот
Нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК) относятся к сложным высокомолекулярным соединениям, состоят из небольшого числа индивидуальных химических компонентов более простого строения. Так, при полном гидролизе нуклеиновых кислот (нагревание в присутствии хлорной кислоты) в гид ...
Гюи Патэн
Преданный ученик Риолана-сына Гюи Патэн, один из корифеев тогдашней медицины, лейб-медик Людовика XIV, писал по поводу открытия Гарвея: «Мы переживаем эпоху невероятных выдумок, и я даже не знаю, поверят ли наши потомки в возможность такого безумия». Он называл открыт ...